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AH109酵母雙雜交菌株 貨號：st085
基因型：MATa,trp1-901,leu2-3,112,ura3-52,his3-200,gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3,MEL1GAL2UAS-GAL2TATA-ADE2,URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ
信息：培養基：YPDA
菌株類(lèi)別：酵母菌
培養條件：28℃，有氧，YPDA
質(zhì)粒轉化：電轉
保存方式：30%甘油，-20℃
基本應用：酵母雙雜交
菌株簡(jiǎn)介：AH109菌株來(lái)源于PJ69-2A 酵母菌株，將lacZ報告基因引入PJ69-2A誕生了AH109，此菌株是Clontech公司開(kāi)發(fā)的GAL4系統酵母雙雜實(shí)驗用菌株，MATa型，可直接轉化質(zhì)?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過(guò)mating操作進(jìn)行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation marker為: trp1, leu2，報告基因為：lacZ, HIS3, ADE2, MEL1。AH109 -GAL4酵母雙雜系統需要兩種質(zhì)粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。質(zhì)粒PGBKT7的篩選標志為T(mén)RP1，用于表達DNA-BD(來(lái)自酵母轉錄因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒PGADT7的篩選標志為L(cháng)EU，用于表達AD(GAL4 C端768 ~881 位氨基酸)與目標蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4系統原理：一個(gè)完整的酵母轉錄因子GAL4可分為功能上相互獨立的兩個(gè)結構域：位于N端1 ~ 174位氨基酸區段的DNA結合域（DNA-BD）和位于C端768 ~881 位氨基酸區段的轉錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并與之結合。而AD可以啟動(dòng)UAS下游的基因進(jìn)行轉錄。BD和AD單獨存在不能激活轉錄，但當二者接近時(shí)，則呈現完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動(dòng)子下游基因轉錄表達。正常條件下，BD不與AD結合，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合，形成 bait 融合蛋白（bait -BD）和 prey 融合蛋白（prey-AD），如果 bait 和 prey發(fā)生相互作用，就會(huì )促使 BD 和 AD 的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報告基因的轉錄。AH109有四個(gè)報告基因：lacZ, HIS3, ADE2, MEL1，分別由三種不同的啟動(dòng)子（GAL1，GAL2，MEL1）啟動(dòng)，這三種啟動(dòng)子只有GAL4識別的17bp核心區相同，其余部分均不同，大大降低了酵母雙雜假陽(yáng)性發(fā)生的概率
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